基因型

F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)

簡要說明

OverExpress C43(DE3)、OverExpress C41(DE3)兩個菌株均起源于BL21(DE3)，其優(yōu)點是可以高效表達毒性蛋白或疏水性蛋白。OverExpress C41(DE3)跟BL21(DE3)的區(qū)別在于其基因組含有至少一個未知突變，這個未知突變使其獲得了高效表達毒性蛋白(1-5)的能力，此突變位點參與大腸桿菌表達毒性蛋白時的細胞死亡途徑；OverExpress C43(DE3)來源于OverExpressC41(DE3)，是通過篩選OverExpress C41(DE3)對另一個不同毒性蛋白的抗性菌株獲得。OverExpress C43(DE3)菌株具有比OverExpress C41(DE3)更強的表達毒性蛋白和疏水性蛋白的能力，所以說OverExpress C43(DE3) 菌株與BL21(DE3)相比擁有至少兩個未知突變，正是這兩個未知突變使其獲得了更廣泛的表達毒性蛋白或疏水性蛋白的能力。此菌株含有DE3區(qū)，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。OverExpressC43(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達5×108 cfu/μg DNA。

操作說明

1、OverExpress C43(DE3)感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒，并用手撥EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無菌培養(yǎng)液，37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

 4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1、感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

3. 誘導(dǎo)時，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。

4. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。